| 研究課題名 | 強発癌性B型肝炎ウイルスの同定 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2002 |
| 研究期間 | 2001-2002 |
| 研究課題番号 | 13877071 |
| 研究代表者 | 小池 和彦 (コイケ,カズヒコ) 東京大学・医学部附属病院・助教授 |
| 研究代表者番号 | 80240703 |
| 研究機関 | 東京大学 研究機関番号：12601 |
| 研究分担者 | 森屋 恭爾
(モリヤ キョウジ)
東京大学・医学部附属病院.
講師
(00272550)
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| 研究種目 | 萌芽研究 研究種目コード：401 |
| 研究分野[2] | 内科学一般 研究分野コード：631 |
| キーワード | 肝炎 / B型肝炎ウイルス / HBx蛋白 / 機能解析 / CRE-loxP |
| 研究概要 | HBVキャリアが全て肝癌を発生するわけでは無く、何らかの付加的な因子の解明が必要である。臨床的観点から診ると、HBV感染者における肝発癌スクリーニングの問題点は、C型肝炎の場合と異なり「肝癌発生の高危険群」の設定ができないことである。将来肝癌を発生しやすいウイルスが同定できれば、肝癌を早期に察知して早期に治療することが可能となる。この目的のため、発現スイッチ・オン・システムを用いた機能的解析によって強発癌性B型肝炎ウイルスを同定べく、発現ベクターを構築した。まず患者血清からDNAを抽出し、B型肝炎ウイルス(HBV)X遺伝子を含む遺伝子断片をPCR法で増幅した。次いで、制限酵素DraIとBglIIで、X遺伝子とそのエンハンサー、プロモーターおよびポリAシグナルを切り出した。これをプラスミドに入れ、その後AluIサイトに、ファージ由来のloxP配列2個の間にネオマイシン耐性遺伝子とポリA選択シグナルを挟みこんだ遺伝子断片lneolpを挿入した。 これを完全な癌化細胞ではないRat-1あるいはL細胞に導入し、一連の細胞株を樹立した。一人の患者血清から得られたHBV-DNAクローンについて樹立された、それぞれ複数の細胞株を10%FCSを含むあるいは含まない培地中で培養し、細胞株の増殖速度、ploidy、コロニー形成能を検討した。細胞株毎に増殖能にはバラツキが見られたが、ひとつのHBV-DNAクローンWT-2は他のクローンに比して明らかな増殖亢進を、繰り返しもたらした。本クローンの塩基配列を解析中である。 |
| 発表文献 | Koike K, et al.：
"Role of hepatitis viruses in hepatocarcinogenesis"
Oncology 62.
29-37
(2002)
Perlemuter G, et al.： "Hepatitis C virus core protein inhibits microsomal triglyceride transfer protein activity and very low density lipoprotein secretion : a model of viral-related steatosis" FASEB J 16. 185-194 (2002) Tsutsumi T, et al.： "Interaction of Hepatitis C Virus Core Protein with Retinoid X Receptor-a Modulates its Transcriptional Activity" Hepatology 35. 937-946 (2002) Tsutsumi T, et al.： "Intrahepatic cytokine expression and AP-1 activation in mice transgenic for hepatitis C virus core protein" Virology 304. 415-424 (2002) Koike K, et al.： "Role of hepatitis C virus in the development of hepatocellular carcinoma : Transgenic approach to viral hepatocarcinogenesis" J Gastroenterol Hepatol 17. 394-400 (2002) Koike K, et al.： "Hepatitis C virus and hepatocarcinogenesis" J Gastroenterol 37. 55-64 (2002) |