| 研究課題名 | 神経堤細胞分化・増殖・死の転写因子による制御とその異常 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2005 |
| 研究期間 | 2004-2005 |
| 研究課題番号 | 16590240 |
| 研究代表者 | 幡野 雅彦 (ハタノ マサヒコ) 千葉大学・バイオメディカル研究センター・助教授 |
| 研究代表者番号 | 20208523 |
| 研究機関 | 千葉大学 研究機関番号：12501 |
| 研究分担者 | 藤村 理紗
(フジムラ リサ)
千葉大学・バイオメディカル研究センター.
助手
(30376363)
徳久 剛史 (トクヒサ タケシ) 千葉大学・大学院・医学研究院. 教授 (20134364) 有馬 雅史 (アリマ マサフミ) 千葉大学・大学院医学研究院. 講師 (00202763) 坂本 明美 (サカモト アケミ) 千葉大学・大学院・医学研究院. 助手 (90359597) |
| 研究種目 | 基盤研究(C) 研究種目コード：320 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 病態医化学 研究分野コード：6906 |
| キーワード | Nczf / 転写抑制因子 / Zinc finger protein / DNA結合配列 / 神経堤細胞 / 腸管神経節 / Hirschsprung病類縁疾患 / 遺伝子欠損マウス |
| 研究概要 | Nczfの転写制御因子としての機能、および生体内での機能を明らかにすることを目的としレポーターアッセイおよびNczf蛋白が結合するDNAコンセンサス配列を決定した。Gal4-Nczf融合蛋白とGal4結合配列のレポータープラスミドの系を用いてNczfの転写制御活性について検討した。その結果Gal4-Nczf発現ベクターの量依存性にGal4ルシフェラーゼ活性が抑制され、Nczfは転写抑制因子として機能することが明らかとなった。次にNczfの11個のzinc finger部分とGSTの融合蛋白を作成し(GST-Nczf-ZF)、SAAB法(selection and amplify binding method)を用いてNczfの結合するDNAコンセンサス配列を同定、解析した。5'側と3'側にそれぞれ20bpのprimer配列を持ち、中央に15bpまたは35bpのランダム配列を持つ二本鎖DNA(CTGGATCCTAAGATTCCCTG-N15bp or 35bp-AGGAATTCAGCTTTGAGCCT)を作成し、このDNA fragmentをGST-Nczf-ZF融合タンパクと結合させ、候補配列を含むDNA fragmentを回収した。得られたDNA fragmentをPCR法にて増幅し、PCR産物を再度融合タンパクと結合させた。同様の反応を6回繰り返し、得られたDNA fragmentのシークエンスを確認しコンセンサス配列を選定した。その結果8bpのコアを含むコンセンサス配列が決定された。次に選定された配列をもとにEMSA(=electro mobility shift assay)を試行しNczfのzinc fingerとコンセンサス配列の結合を確認した。また得られたNczfコンセンサス配列をゲノム上で検索したところ、ヒトおよびマウスのエンドセリンレセプターBにおいて腸管神経細胞での発現を制御するENSエンハンサーとよばれる領域に複数存在することが明らかとなった。エンドセリンレセプターBはヒトHirschsprung病の原因遺伝子でもあることより、今後NczfによるエンドセリンレセプターB遺伝子発現制御機構の解析およびヒトHirschsprung病およびその類縁疾患(IND)におけるNczfの遺伝子異常などについても研究をすすめていく予定である。 |
| 発表文献 | Asari, S., et al.：
"Abnormal erythroid differentiation in neonatal Bcl6-deficient mice."
Exp.Hematol. 33.
26-34
(2005)
Nishio, S., et al.： "Pkdl regulates immortalized proliferation of renal tubular epithelial cells through induction of P53 and activation of JNK." J.Clin.Invest. 115. 910-918 (2005) Kawakami, H., et al.： "Transcriptional activation of survivin through the NF-kappaB pathway by human T-cell leukemia virus type I tax." Int.J.Cancer 115. 967-974 (2005) Ohkubo, Y., et al.： "A role for c-Fos/AP-1 in B lymphocyte terminal differentiation." J.Immunol. 174. 7703-7710 (2005) Chandrasekar, B., et al.： "The pro-atherogenic cytokine interleukin-18 induces CXCL16 expression in rat aortic smooth muscle cells via MyD88, IRAK, TRAF6, c-Src, PI3K, Akt, JNK, and AP-1 signaling" J.Biol.Chem. 280. 26263-26277 (2005) Inoue, A., et al.： "Overexpression of Nd1-S, a variant form of newkelch family protein, perturbs the cell cycle progression of fibroblasts." DNA Cell Biol. 24. 30-34 (2005) Arguni, E., et al.： "Strategies for disease control." Elsevier. 216 (2005) |