| 研究課題名 | DNA組換・修復における免疫不全症の新規原因遺伝子Artemisの機能解析 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2004 |
| 研究期間 | 2003-2004 |
| 研究課題番号 | 15790169 |
| 研究代表者 | 石合 正道 (イシアイ マサミチ) 川崎医科大学・医学部・助教授 |
| 研究代表者番号 | 90298844 |
| 研究機関 | 川崎医科大学 研究機関番号：35303 |
| 研究種目 | 若手研究(B) 研究種目コード：260 |
| 研究分野[3] | 病態医化学 研究分野コード：6906 |
| キーワード | DNA修復 / 免役不全症 / 非相同末端結合(NHEJ) / 放射線感受性 / リン酸化 / V(D)J組換え |
| 研究概要 | RS-SCID免疫不全症の原因遺伝子Artemisと相同性の高い遺伝子が他に2種類存在する(SNM1A、SNM1B、SNM1C/Artemis : SNM1ファミリー)。代表者らの解析により、SNM1ファミリーは二重鎖DNA切断修復に関与するSNM1C/ArtemisとDNA鎖間架橋(ICL)修復に関与するSNM1A、SNM1Bの2つに分かれる(Ishiai et al.2004)。 本年度は、樹立した欠損細胞を用いて、DNA修復におけるSNM1ファミリーの分子作用機序を明らかにすることを目的に、まず遺伝学的な検証を行った。SNM1C/Artemisについては、ArtemisとDNA-PKの二重変異細胞を作製し、生体内でArtemisの機能はDNA-PKに依存することを明らかにした。SNM1A、SNM1Bについても同様に遺伝学的検討を行い、SNM1Aは既存のICL修復経路やSNM1Bと独立の新規ICL修復経路であることを証明した(Ishiai et al.2004)。 Artemisのリン酸化について、さらに生化学的検討を行った。試験管内でArtemisはDNA-PKと複合体を形成し、リン酸化されることを確認した。一方、生体内ではArtemisは定常状態でリン酸化されていること、放射線照射によりさらにリン酸化を受けることが判明した。生体内でのArtemisのリン酸化酵素の検討を現在進めており、DNA-PK以外の別のキナーゼが関与する事が示唆された。 最後に、昨年度検討した、生体内で直接、非相同末端結合(NHEJ)型のDNA修復を検出する系(プラスミ再結合アッセイ)を確立し、Artemisの機能ドメインについて解析を行った。ArtemisのDNA修復機能にはSNM1ドメインと複数のリン酸化部位が必要であることを明らかにした。 |
| 発表文献 | Ishiai M et al.：
"DNA cross-link repair protein SNM1A interacts with PIAS1 in nuclear focous formation"
Mol.Cell.Biol. 24・24.
10733-10741
(2004)
Yamamoto K.et al.： "Fanconi anemia protein FancD2 promotes immunogloburin gene conversion and DNA repair through a mechanism related to homologous recombination" Mol.Cell.Biol. 25・1. 34-43 (2005) Hirano S.et al.： "Functional relationships of FANCC to homologous recombination translesion synthesis, and BLM" EMBO J. 24・2. 418-427 (2005) Matsushita N.et al.： "Role of NAD-dependent deacetylases SIRT1 and SIRT2 in radiation and cisplatin-induced cell death in vertebrate cells" Genes to Cells 10(in press). (2005) |