| 研究課題名 | 未知のポリADP-リボシル化タンパク質の同定とその修飾部位の決定 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2005 |
| 研究期間 | 2004-2005 |
| 研究課題番号 | 16390072 |
| 研究代表者 | 三輪 正直 (ミワ マサナオ) 長浜バイオ大学・バイオサイエンス学部・教授 |
| 研究代表者番号 | 20012750 |
| 研究機関 | 長浜バイオ大学 研究機関番号：34204 |
| 研究分担者 | 亀村 和生
(カメムラ カズオ)
長浜バイオ大学・バイオサイエンス学部.
講師
(00399437)
|
| 研究種目 | 基盤研究(B) 研究種目コード：310 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | 翻訳後修飾 / ポリADP-リボシル化 / ポリ(ADP-リボース)分解酵素 / ショウジョウバエ / ポリ(ADP-リボース)合成酵素 / 中心体 |
| 研究概要 | 中心体におけるポリADP-リボシル化タンパク質として、現在2つを同定している。一つはがん抑制遺伝子産物p53であり、もう一つは、サイクリンE/CDK2によって中心体でリン酸化を受け、中心体複製制御に関与するNucleophosmin/B23である。p53のポリADP-リボシル化部位の同定のために、まず、GST-p53融合タンパク質を大腸菌内で作成を行った。これを用いて、in vitroで全長のp53(aa 1-393)がPARP-1により、ポリADP-リボシル化を受けることを確認した。次に、ドメインごとに分けたGST-truncated p53を作成し、ポリADP-リボシル化されるドメインを決定した。現在約40アミノ酸の長さに相当するペプチドを部分的に欠失するGST-truncated p53を作製しており、ポリADP-リボシル化を受けるペプチド領域を調べている。その結果、p53のDNA結合ドメインの一部に相当する40アミノ酸に相当する部位を欠失した場合に著明にポリADP-リボシル化が低下する結果を得ている。 抗ポリADP-リボースマウスモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ(10H)を以前に作成した。In vivoでポリADP-リボシル化されたタンパク質を網羅的に同定するために、この抗体カラムを作成し、中心体画分やそれぞれの細胞周期に応じた画分から、ポリADP-リボシル化されたタンパク質を分離する条件を検討している。量的な問題から、まず、In vivoでポリADP-リボシル化されるタンパク質として、PARGノックアウト・ショウジョウバエの中枢神経系で過剰にポリADP-リボシル化されたタンパク質を検出するため、そのノックアウトのハエをグラム単位で集めており、現在、その精製にかかっている。 |
| 発表文献 | Sugihara, E., Miwa, M., et al.：
"Suppression of centrosome amplification after DNA damage depends on p27 accumulation"
Cancer Res 66(In press).
(2006)
三輪 正直, 益谷 美都子： "ポリ(ADP-リボース)代謝と細胞機能" 生化学(日本生化学会誌:総説) 78(In press). (2006) 三輪 正直, 金居 正幸, 内田 真啓, 花井修次： "タンパク質科学イラストレイテッド(竹縄 忠臣編)pp.160-167(分担執筆)" 羊土社. 332 (2005) |