遺伝子治療のための染色体複製起点由来のエピゾームベクターの開発に関する研究

研究課題名	遺伝子治療のための染色体複製起点由来のエピゾームベクターの開発に関する研究
レコードタイプ	研究実績報告
報告年度	2004
研究期間	2003-2004
研究課題番号	15659072
研究代表者	正井久雄　 (マサイヒサオ)　財団法人東京都医学研究機構・東京都臨床医学総合研究所・副参事研究員
研究代表者番号	40229349
研究機関	(財)東京都医学研究機構　研究機関番号：82609
研究分担者	須賀田直子　 (スガタナオコ) 　財団法人東京都医学研究機構. 　主任研究員　 (30344071)
研究種目	萌芽研究　研究種目コード：401
研究分野[3]	医化学一般　研究分野コード：6905
キーワード	エピゾームベクター / 遺伝子治療 / ORC / 複製起点 / 複製開始複合体 / MCM / EBウィルス / oriP
研究概要	遺伝子治療において、遺伝子導入に用いるベクターとしては、主に、ウィルスに由来したベクターが用いられているが、一長一短があり、種々の改良がなされている。一方、ウィルスに由来しない毒性の低い、自律複製能を有するエピソームベクターは、動物細胞ではまだ開発されていない。我々は、真核細胞の複製開始機構に基づいて、複製開始複合体を特定の配列にtargetすることにより、より効率良く複製複合体の構築をおこない、強い自律複製能を有するエピゾームベクターの開発を計画した。この目的のために、本年度は、分裂酵母ORCのDNA結合ドメインであるORC4のDNA結合ドメインをヒトORC4のN端に融合した分裂酵母-ヒトキメラORC4(Sp-huORC4)を作製し、動物細胞内で発現した。さらにこのplasmid上に、分裂酵母ORC4の標的配列であるAT-rich複製起点配列を導入した。このplasmidを現在動物細胞に導入し、一過性に自律的に複製できるかどうかを検討した。現在、さらに効率よく複製し、安定に維持されるベクターの開発をすすめている。
発表文献	Kim, J-K, Masai, H.：　 "Genetic dissection of mammalian Cdc7 kinase : Cell cycle and developmental roles." 　Cell Cycle 3. 　300-304　 (2004) 　 Fujii-Yamamoto, H., Kim, J-M., Arai, K., Masai, H.：　 "Cell cycle and developmental regulations of replication factors in mouse embryonic stem cells." 　J.Biol.Chem. 280. 　12976-12987　 (2005) 　 Yoshizawa, N., Ishii, A., Taniyama, C., Matsui, E., Arai, K., Masai, H.：　 "A second human Dbf4/ASK-related protein, Drf1/ASKL1 is required for efficient completion of S and M phases." 　J.Biol.Chem. 280. 　13062-13070　 (2005) 　 Yamashita, N., Kim, J-M., Koiwai, O., Arai, K., Masai, H.：　 "Functional analysis of mouse ASK, an activator subunit for Cdc7 kinase, using conditional ASK knockout ES cells." 　Genes to Cells (In press). 　 (2005) 　 Schnepp, R.W., Hou, Z., Wang, H., Petersen, S., Silva, A., Masai, H., Hua, X.：　 "Functional interaction between tumor suppressor menin and activator of S-phase kinase." 　Cancer Res. 64. 　6791-6796　 (2004) 　 Kurita, M., Suzuki, H., Masai, H., Mizumoto, K., Ogata, E., Nishimoto, I., Aiso, S., Matsuoka, M.：　 "Overexpression of CR/periphilin downregulates Cdc7 expression and induces S-phase arrest." 　Biochem.Biophys.Res.Commun. 32. 　554-561　 (2004)