| 研究課題名 | 細胞内分子架橋法を利用した新たな機能的遺伝子クローニング法の開発 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2004 |
| 研究期間 | 2003-2004 |
| 研究課題番号 | 15659066 |
| 研究代表者 | 荒瀬 尚 (アラセ ヒサシ) 大阪大学・微生物病研究所・助教授 |
| 研究代表者番号 | 10261900 |
| 研究機関 | 大阪大学 研究機関番号：14401 |
| 研究種目 | 萌芽研究 研究種目コード：401 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | 遺伝子スクリーニング / レトロウィルスライブラリー / cDNAライブラリー / シグナル遺伝子 / B細胞 / CD8分子 / 機能的遺伝子検索 |
| 研究概要 | 本研究では、細胞内分子架橋を用いることによる新たなシグナル伝達分子検索法の開発を試みた。本研究では、細胞外CD8分子や変異型エストロジェンレセプターやFK結合タンパクとのキメラ分子が産生されるような新たなレトロウイルスcDNAライブラリー用ベクターを開発し、ライブラリーから産生されたキメラ分子が、架橋刺激によって正常に活性化されるかを検討し、本法が可能かどうかを明らかにする。本方法では、キメラ分子のライブラリーの作製が必要なため、cDNAライブラリーのサイズや質が非常に重要な要因となる。そこで、まず、CD8分子とのキメラライブラリーに対してcDNAのサイズを最適化したライブラリーの作製を行なった。その結果、新たなB細胞活性化分子として、NFAM1をクローニングした。NFAM1のトランスフェクタントやトランスジェニックマウスを用いることにより、NFAM1はB細胞の活性化や分化に重要な機能を担っている分子であることが明らかになったと同時に、本法が、シグナル伝達分子の解明に非常に有用な方法であることが判明した(Ohtsuka et al.Proc.Natl.Acad.Sci USA 2004)。さらに、最適化したcDNAライブラリーを用いて、シグナル伝達分子の検索を行なったところ、4回膜貫通型の新規分子をクローニングし、B細胞の生存に関与していると思われた(Suenaga et al.投稿中)。以上のように、CD8キメラライブラリーを用いた細胞内架橋によるシグナル伝達分子は、ポストゲノムの時代において、重要な機能的遺伝子検索方法であることが明らかになった。 |
| 発表文献 | Ishikawa S, Arase N, Suenaga T, Saita Y, Noda M, Kuniyama T, Arase H, Saito T：
"Involvement of FeRγ in signal transduction of osteoclast-associated receptor (OSCAR)."
Int Immunol. 16巻7号.
1019-1025
(2004)
Ohtsuka M, Arase H, Takeuchi A, Yamasaki S, Shiina R, Suenaga T, Sakurai D, Yokosuka T, Arase N, Iwashima M. Kitamura T, Moriya H, Saito T.： "NFAM1, an immunoreceptor tyrosine-based activation motif-bearing molecule that regulates B cell development and signaling." Proc Natl Acad Sci U S A. 101巻21号. 8126-8131 (2004) Arase H, Lanier LL： "Specific recognition of virus-infected cells by paired NK receptors" Rev Med Viol. 14巻2号. 83-93 (2004) Carlyle JR, Jamieson AM, Gasser S.Clingan CS, Arase H, Raulet DH： "Missing self-recognition of Ocil/Clr-b by inhibitory NKR-P1 natural killer cell receptors." Proc Natl Acad Sci U S A 101巻10号. 3527-3532 (2004) Shiratori I, Ogasawara K, Saito T, Lanier LL, Arase H： "Activation of natural killer cells and dendritic cells upon recognition of a novel CD99-like ligand by paired immunoglobulin-like type 2 receptor." J Exp Med 199巻4号. 525-533 (2004) Sakurai D, Yamasaki S, Arase K, Park SY, Arase H, Konno A, Saito T.： "FcεRIγ-ITAM is differentially required for mast cell function in vivo." J Immunol 172巻4号. 2374-2381 (2004) |