| 研究課題名 | 血液・血管システム形成の分子制御プログラム |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2004 |
| 研究期間 | 2003-2004 |
| 研究課題番号 | 15390086 |
| 研究代表者 | 山本 雅之 (ヤマモト マサユキ) 筑波大学・大学院・人間総合科学研究科・教授 |
| 研究代表者番号 | 50166823 |
| 研究機関 | 筑波大学 研究機関番号：12102 |
| 研究分担者 | 清水 律子
(シミズ リツコ)
筑波大学・大学院・人間総合科学研究科.
講師
(40226262)
|
| 研究種目 | 基盤研究(B) 研究種目コード：310 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | 造血幹細胞 / GATA-2 / GFPノックインマウス / 条件付きノックアウトマウス |
| 研究概要 | GATA-2遺伝子の血球特異的なプロモーター・第1エクソンの下流に緑色蛍光蛋白質(GFP)遺伝子を挿入したマウス(ノックインノックアウトマウス:G2-GFP)を樹立し,骨髄におけるGATA-2発現細胞の同定および解析を行なった.ヘテロマウスの骨髄では、全細胞の約0.5%の割合でGFP陽性細胞が存在し,これらの細胞は血球分化マーカー陰性(Lin^-),c-Kit^+の造血前駆細胞およびLin^-/c-Kit^+/Sca1^+の造血幹細胞であった.GFP陽性細胞をOP9ストローマ細胞と共培養したところ,30日以上にわたり多系統の血球細胞を産生したことから,この細胞は未分化で増殖能の高い細胞であることが示唆された.このGFP陽性細胞では,c-Myc,Cyclin A2,Cyclin B1等の増殖中の細胞で発現する遺伝子が,GFP陰性細胞に比べて多く発現していた.さらに,Lin^-/c-Kit^+/GFP^+分画には,30%以上の高い割合でS/G2/M期の細胞が含まれていた.これらの結果から,GATA-2は骨髄造血幹細胞および前駆細胞の細胞周期進行に関与する遺伝子発現を制御していることが示唆される. このようなGATA-2の造血前駆細胞の増殖における機能をより詳細に解析するために,loxP配列を両端に有するGATA-2 cDNAをGATA-2遺伝子の翻訳開始部位にノックインする条件付きノックアウトマウスの作成した(G2-CKO).GATA-2ノックアウトマウスは胎生致死となるため,本マウスによってのみ成獣骨髄でのGATA-2の機能を検討することができる.すでに,同マウスをインターフェロン投与により誘導的にCreリコンビナーゼを発現するMxl-Creトランスジェニックマウス,および,上述のGFPノックインマウスと交配し,三重複合体(G2^<GFP/CKO>::Mx1-Cre)を確立している.現在,骨髄移植法を用いた骨髄造血前駆細胞におけるGATA-2の機能関与をGFPを指標として検討する系を立ち上げている. |
| 発表文献 | Shimizu, R., Ohneda, K., Engel, J.D., Trainor, C.D., Yamamoto, M.：
"Transgenic rescue of GATA-1-deficient mice with GATA-1 lacking a FOG-1 association site phenocopies patients with X-linked thrombocytopenia."
Blood 103.
2560-2567
(2004)
Ishii, T., Itoh, K., Ruiz, E., Leake, D.S., Unoki, H., Yamamoto, M., Mann, G.E.： "Role of Nrf2 in the regulation of CD36 and stress protein expression in murine macrophages : activation by oxidatively modified LDL and 4-hydroxynonenal" Circulation 94. 609-616 (2004) Wakabayashi, N., Dinkova-Kostova, A.T.Holizclaw, W.D., Kang, M-L, Kobayashi, A., Yamamoto, M., Kensler, T.W., Talalay, P.： "Protection against electrophile and oxidant stress by induction of the phase 2 response : Fate of cysteines of the Keap1 sensor modified by inducers." Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101. 2040-2045 (2004) Kang, MI, Kobayashi, A., Wakabayashi, N., Kim, S.G., Yamamoto, M.： "Scaffolding of Keap1 to the actin cytoskeleton controls the function of Nrf2 as key regulator of cytoprotective phase 2 genes." Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101. 2046-2051 (2004) Yoshida, S., Takakura, A., Ohbo, K., Abe, K., Wakabayashi, J., Yamamoto, M., Suda, T., Nabeshima, Y-i.： "Neurogenin3 delineates the earliest stages of spermatogenesis in the mouse testis." Dev.Biol 269. 447-458 (2004) Imagawa, S., Yamaguchi, Y., Ogawa, K., Obara, N., Suzuki, N., Yamamoto, M., Nagasawa, T.： "Interleukin-6 and tumor necrosis factor-a in patients with obstructive sleep apnea-hypop nea syndrome" Respiration 71. 24-29 (2004) Motohashi, H., Katsuoka, F., Engel, J.D., Yamamot, M.： "Small Maf proteins are obligate transcriptional cofactors for normal keratinocyte differentiation in the Keap1-Nrf2 regulatory pathway." Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101. 6379-6384 (2004) Morito, N., Yoh, K., Hirayama, A., Itoh, K., Nose, M., Koyama, A., Yamamoto, M.： "Nrf2 deficiency improves autoimmune nephritis caused by the fas mutation lpr" Kidney Int. 65. 1703-1713 (2004) Ito, T., Tsukumo, S., Suzuki, N., Motohashi, H., Yamamoto, M., Fujii-Kuriyama, Y.： "A constitutively active arylhydrocarbon receptor induces growth inhibition of Jurkat T cells through changes in the expression of genes related to apoptosis and cell cycle arrest." J.Biol.Chem. 279. 25204-25210 (2004) Goldring, C.E.P., Kitteringham, N.R., Elsby, R., Randle, L.E., Clement, Y.N., Williams, D.P., McMahon, M., Hayes, J.D., Itoh, K., Yamamoto, M., Park, B.K.： "Activation of hepatic Nrf2 in vivo by acetaminophen in CD-1 Mice." Hepatology 39. 1267-1276 (2004) Imai, T., Kawai, Y., Tadokoro, Y., Yamamoto, M., Nishimune, Y., Yomogida K.： "In vivo and in vitro constant expression of GATA-4 in mouse postnatal Sertoli cells." 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