| 研究課題名 | KRAZ及びKAP-1のヘテロクロマチン領域における転写抑制メカニズムの解析 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2003 |
| 研究期間 | 2002-2003 |
| 研究課題番号 | 14770052 |
| 研究代表者 | 松田 永照 (マツダ,エイショウ) 奈良先端科学技術大学院大学・バイオサイエンス研究科・助手 |
| 研究代表者番号 | 00335481 |
| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 研究機関番号：14603 |
| 研究種目 | 若手研究(B) 研究種目コード：260 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | KRAB domain / KAP-1 / co-repressor / HP1 / セントロメリックヘテロクロマチン / TSA / gene-trap / BTB domain |
| 研究概要 | 1.KRABドメインを持つKruppleタイプのZnフィンガー因子は、KAP-1というco-repressorを介して転写を拗制することが知られている。申請者が単離した二つのKRABドメインを持つKRAZ1とKRAZ2による転写抑制コンプレックスが、KAP-1とHP1を介してセントロメリックヘテロクロマチンに局在することと、この局在能力と転写活性が相関すること、また、この構造を保つためにはTSA感受性の脱アセチル化酵素の活性が必要であることを明らかにした。TSAによるKRAZ・KAP-1の複合体がセントロメリックヘテロクロマチンに局在するHP1との分離を免疫沈降法の実験より明らかにした。 2.KRAZ・KAP-1のヘテロクロマチン複合体形成におけるヒストン修飾の役割を検証するため、KRAZとKAP-1の欠失変異体と、tetによるon/off可能なstable lineを用いた。Reporter assay及びChip assayの結果より、KRAZ・KAP-1の転写抑制が9番目リジンメチル化ヒストン3(H3-MeK9)が関与することを確認した。又、TSAと5-azacytidineを用いた実験では、KRAZ・KAP-1によるgene silencing状態の維持にはDNAのメチル化が重要であることが示唆された。 3.ヘテロクロマチン領域に局在するBTBドメインを有する転写因子が報告された。申請者はgene-trapを行い、単離同定した新規BTBタンパク質GetBは細胞核に特徴的なドット状がセントロメリックヘテロクロマチン領域に局在することを確認した。GetBの転写抑制には、co-repressorであるCtBPとの結合がヘテロクロマチン領域に共局在することが重要であることを明らかにした。 |
| 発表文献 | Eishou, Matsuda：
"Expression profiling with arrays of randomly disrupted genes in mouse embryonic stem cells Ieads to in vivo functional analysis"
Proceeding of the National Academy of Science of the United States of America 10.
1073
(2004)
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