| 研究課題名 | 新規非膜系オルガネラcentriolar satellitesの構造・機能解析 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2003 |
| 研究期間 | 2002-2003 |
| 研究課題番号 | 14770047 |
| 研究代表者 | 久保 亮治 (クボ,アキハル) 京都大学・医学研究科・助手 |
| 研究代表者番号 | 70335256 |
| 研究機関 | 京都大学 研究機関番号：14301 |
| 研究種目 | 若手研究(B) 研究種目コード：260 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | PCM-1 / 中心体 / 微小管 / Centriolar satellites / 細胞生物学 |
| 研究概要 | 1.PCM-1のドミナントネガティブ変異体によるcentriolar satellitesの機能・構造解析 PCM-1蛋白はcentriolar satellitesのscaffold proteinであることをこれまでの研究で示してきた。今回PCM-1蛋白同士の結合を担う部位を同定した。このPCM-1同士の結合を担う部分のペプチドを細胞に高発現させるとcentriolar satellitesを分解する事ができた。このペプチドによりendogenousなPCM-1同士の結合が阻害される事でcentriolar satellitesが分解すると考えられる。Centriolar satellitesが分解された細胞はPCM-1をRNAiによりknock-downした細胞とほぼ同じphenotype(中心体のpericentrin量の減少、細胞周期停止)を示した。これらの結果から、PCM-1蛋白がcentriolar satellitesという構造を取ることが、その機能発現に必須であることが示された。 2.ツーハイブリ法によるPCM-1結合蛋白の探索 PCM-1蛋白の各ドメインをbaitとしてツーハイブリ法を行い、PCM-1結合蛋白を探索した。いくつかのcandidateについて、タグをつけて細胞に発現させ、その局在を検討した。また、可能性のあるものについて抗体を作成し、細胞内局在およびPCM-1との結合を検討中である。 |
| 発表文献 | Akiharu Kubo, H.Sasaki, A.Yuba-Kubo, S.Tsukita, N.Shiina：
"Centriolar satellites : molecular characterization, ATP-dependent movement toward centrioles and possible involvement in ciliogenesis"
Journal of Cell Biology 147巻、5号.
969-980
(1999)
Akiharu Kubo, Shoichiro Tsukita： "Non-membranous granular organelle consisting of PCM-1 : subcellular distribution and cell-cycle-dependent assembly/disassembly" Journal of Cell Science 116巻、5号. 919-928 (2003) Matsuda M, Kubo A, Furuse M, Tsukita S.： "A peculiar internalization of claudins, tight junction-specific adhesion molecules, during the intercellular movement of epithelial cells." Journal of Cell Science 117巻、7号. 1247-1257 (2004) |