| 研究課題名 | Wntシグナルの抑制因子ICATを利用した新規Wnt標的遺伝子の同定 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2003 |
| 研究期間 | 2002-2003 |
| 研究課題番号 | 14770042 |
| 研究代表者 | 中村 勉 (ナカムラ,ツトム) 東京大学・分子細胞生物学研究所・助手 |
| 研究代表者番号 | 30302798 |
| 研究機関 | 東京大学 研究機関番号：12601 |
| 研究種目 | 若手研究(B) 研究種目コード：260 |
| 研究分野[3] | 医化学一般 研究分野コード：6905 |
| キーワード | Wnt / シグナル伝達 / ICAT / TGF-β / BAMBI / 癌 |
| 研究概要 | 私たちが独自に同定したWntシグナル抑制因子ICATの作用を利用して、新たなWnt標的遺伝子の同定を試み、以下のような成果を得た。 1)Wntシグナル伝達経路が恒常的に活性化されているヒト大腸癌細胞株SW48に、アデノウイルス発現系を用いてICATを導入した後、cDNAサブトラクションを行うことによって、ICATによって発現が減少する遺伝子を単離した。その結果、新規Wnt標的遺伝子の候補として、TGF-βシグナル抑制因子BAMBIを同定することに成功した。実際、RNAレベル・タンパク質レベルともに、BAMBIの発現はICATによって抑制されることを確認した。 2)BAMBIの発現は活性化型β-Catenin(Wntシグナルの活性化因子)によって誘導され、逆にTCF-4(Whtシグナルの活性化因子)のドミナントネガティブ変異体によって抑制された。 3)BAMBIの開始コドンを含む約7kbのゲノムDNA断片を単離した。この断片中には8か所のTCF結合配列が存在していた。このゲノムDNA断片の欠失変異体および点突然変異体を用いたルシフェラーゼアッセイおよびゲルシフトアッセイを行った。その結果イントロン1にTCF-4が直接結合し、β-Catenin依存性の転写活性化を増強することを見出した。したがって、BAMBIはWntシグナルの直接の標的遺伝子であることが示された。 4)ヒト癌におけるBABMBIの発現を解析した。その結果、ヒト大腸癌の臨床検体の72%、ヒト肝癌の臨床検体の60%の症例で、正常組織と比較してBAMBIの発現が顕著に亢進していることを見出した。このことから、標的遺伝子BAMBIの発現が異常に亢進することにより、TGF-β依存性の増殖抑制機構が破綻することが示唆された。これは、Wntシグナルの異常な活性化による癌化の新たなメカニズムである。 |
| 発表文献 | Sekiya T：
"Identification of BMP and activin membrane-bound inhibitor (BAMBI), an inhibitor of transforming growth factor-β signaling, as a target of the β-catenin pathway in colorectal tumor cells."
Journal of Biological Chemistry 279・8.
6840-6846
(2004)
Koyama T： "Mutation and expression of the β-catenin-interacting protein ICAT in human colorectal tumors." Japanese Journal of Clinical Oncology 32・9. 358-362 (2002) Sekiya T： "Overexpression of Icat induces G_2 arrest and cell death in tumor cell mutants for adenomatous polyposis coli, β-catenin, or Axin." Cancer Research 62・11. 3322-3326 (2002) |