| 研究課題名 | G蛋白質連関型ドーパ受容体候補の機能解析と新規低分子活性物質の構造決定 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2005 |
| 研究期間 | 2004-2005 |
| 研究課題番号 | 16390068 |
| 研究代表者 | 五嶋 良郎 (ゴシマ ヨシオ) 横浜市立大学・大学院・医学研究科・教授 |
| 研究代表者番号 | 00153750 |
| 研究機関 | 横浜市立大学 研究機関番号：22701 |
| 研究分担者 | 矢上 達郎
(ヤガミ タツロウ)
横浜市立大学・医学部.
助手
(00363812)
中村 史雄 (ナカムラ フミオ) 横浜市立大学・医学部. 準教授 (10262023) 梶原 康宏 (カジワラ ヤスヒロ) 横浜市立大学・大学院・国際総合科学研究科. 準教授 (50275020) 紙谷 義孝 (カミヤ ヨシタカ) 横浜市立大学・付属病院. 助手 (90381491) |
| 研究種目 | 基盤研究(B) 研究種目コード：310 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 薬理学一般 研究分野コード：6904 |
| キーワード | ドーパ / 神経伝達物質 / Gタンパク質連関型受容体 / 線虫 / NMR |
| 研究概要 | C06H5.7を発現させたアフリカツメガエル卵母細胞において、電気生理学的活性を測定した。L-DOPA溶液は調製直後においては無色透明な溶液で、電気生理学的活性を示さなかった。しかし、調製2日後のL-DOPA溶液は褐色を呈し、100_M以上で内向き電流応答を誘発した。物質の極性の差を利用して分離する逆相カラムを用いて、HPLCにより調製2日後のL-DOPA溶液を分画し、6つの画分を得た。物質の極性の差を利用して分離する逆相カラムを用いて、HPLCにより調製2日後のL-DOPA溶液を分画し、6つの画分を得た。第5画分(A5)および第6画分(A6)には弱い活性が検出された。第二画分は、その溶出時間よりL-DOPAが含まれていると推察された。 NMR解析においてA5では、7.5ppm近傍に2つ、7.1ppm近傍に1つのシグナルが検出され、ベンゼン環を有する化合物と推定された。一方、A6では、7.4,7.0,4.6,4.0,3.7 3.4ppm近傍にそれぞれ1つのシグナルが検出された。A6をさらに逆相カラムで分離すると少なくとも二つの物質が含まれることが明らかとなった。NMRシグナルおよびHPLC溶出時間より、その一つが4-hydroxyphenyllactic acid(HPLA)と推定された。 NMR解析においてS4では、9.7ppm近傍に1つ、7.5ppmに2つ、7.1ppm近傍に1つのシグナルが検出され、3,4-dihydroxybensaldehyde(DHBALD)と推定された。次にDHBALDのNMR解析を行った結果、S4と同一のシグナルパターンを示した。9.7ppm近傍のシグナルはアルデヒド基(-COH)であることが判明した。さらに、S4およびDHBALDを混合した試料において、完全にシグナルパターンが重なった。質量分析においても、DHBALDとS4は同一の質量電荷比を示した。HPLC解析においてもDHBALDとS4の溶出時間が一致した。S4はそのピーク面積から、生成率が約55%であった。電気生理学的解析において、DHBALDはS4と同様に濃度依存的内向き電流応答を誘発することを確認した。 |
| 発表文献 | Uchida Y：
"Semaphorin3A signaling is mediated via sequential Cdk5 and GSK3beta phosphorylation of CRMP2:implication of common phosphorylation mechanism underlying axon guidance and Alzheimer's disease."
Genes to Cells 10・2.
165
(2005)
内田穣： "CRMP2のリン酸化を介した軸索ガイダンスの分子機構" 生化学 77・11. 1424 (2005) Shibakawa YS： "Effects of ketamine and propofol on inflammatory responses of primary glial cell culgures stimulated with lipopolysaccharide." Br J Anaesth 95・6. 803 (2005) Arimura N： "Phosphorylation ofRho kinaseregulates CRMP-2 activity in growth cones." Mol Cell Biol 25・22. 9973 (2005) Shimamura M： "1-3,4-Dihydroxyphenylalanine-inducedc-Fosexpressioniin the CNS under inhibition of central aromatic 1-amino acid decarboxylase." Neuropharmacology (In press). (2005) Misu Y, Goshima Y： "Neurobiology of DOPA as a neurotransmitter" CRS Press. 384 (2005) |