| 研究課題名 | T細胞のアポトーシスにおけるClC-3Bの役割とその制御機構 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2004 |
| 研究期間 | 2003-2004 |
| 研究課題番号 | 15590221 |
| 研究代表者 | 小倉 武彦 (オグラ タケヒコ) 千葉大学・大学院・医学研究院・助手 |
| 研究代表者番号 | 00292673 |
| 研究機関 | 千葉大学 研究機関番号：12501 |
| 研究分担者 | 中谷 晴昭
(ナカヤ ハルアキ)
千葉大学・大学院・医学研究院.
教授
(60113594)
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| 研究種目 | 基盤研究(C) 研究種目コード：320 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 薬理学一般 研究分野コード：6904 |
| キーワード | クロライドチャネル / リンパ球 / チロシンリン酸化 / ClC-3 / アポトーシス |
| 研究概要 | 1.ClCチャネル遺伝子群の中で、ClC-3、ClC-4、ClC-5は互いに相同性が高く、いずれも培養細胞を用いた発現系で外向き整流性のCI^-電流を通すことが知られている。ヒトリンパ球におけるこれらのチャネル遺伝子の発現をRT-PCR法により検討したところ、ClC-3Aおよび3Bはヒト末梢T細胞およびB細胞のいずれにも発現していた。ClC-4は主にB細胞に発現しており、ClC-5はT細胞、B細胞のいずれにも発現していた。活性化させたリンパ球では、ClC-3Aおよび3BはT細胞、B細胞のいずれにも発現していたが、ClC-4はB細胞にのみ発現が認められ、ClC-5はT細胞、B細胞のいずれにもほとんど発現が認められなかった。 2.COS1細胞にClC-3Bとp56^<lck>を共発現させると、ClC-3Bはp56^<lck>によるチロシンリン酸化を受けた。ClC-3B蛋白のアミノ酸配列のうち、リン酸化を受ける可能性があるY342、Y689、Y859の3つのチロシン残基のうちの1つあるいは複数をフェニルアラニンに置換した変異株を用いて同様の検討を行なったところ、Y859に変異を加えるとチロシンリン酸化が起こらなくなった。このことから、ClC-3Bの859番目のチロシンがp56^<lck>によりリン酸化されることが明らかとなった。Y859はClC-3Bに特異的なアミノ酸配列の中のチロシン残基であり、ClC-3Aには存在しない。実際に、ClC-3Aはp56^<lck>によりリン酸化されなかった。 3.HT-1080細胞にHA-tagをつけたClC-3B(HA-ClC-3B)とp56^<lck>を共発現させ、抗HA抗体を用いた免疫蛍光染色を行った。HA-ClC-3Bは、単独で発現させると主に細胞内領域に分布していたが、p56^<lck>を共発現させた場合には、単独で発現させた場合と比較して細胞膜表面への発現が増加していた。 |
| 発表文献 | Sato T.：
"Mitochondrial Ca^<2+> activated K^+ channels in cardiac myocytes : a mechanism of the cardioprotective effect and modulation by protein kinase A."
Circulation 111.
207-212
(2005)
Saito T.： "Role of ATP-sensitive K^+ channels in electrophysiological alterations during myocardial ischemia : a study using Kir6.2 null mice." Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol. 288. H352-H357 (2005) Kuma A.： "Role of autophagy during the early neonatal starvation period." Nature 432. 1032-1036 (2004) Saegusa N.： "Inhibitory effects of AMP 579, a novel cardioprotective adenosine A_1/A_<2A> receptor agonist, on native I_<Kr> and cloned HERG current." Naunyn Schmiedebergs Arch.Phamacol. 370・6. 492-499 (2004) Hamada H.： "Dilated cardiomyopathy caused by aberrant endoplasmic reticulum quality control in mutant KDEL receptor transgenic mice." Mol.Cell.Biol. 24・18. 8007-8017 (2004) Ohtsuka M.： "Cytokine therapy prevents left ventricular remodeling and dysfunction after myocardial infarction through neovascularization" FASEB J. 18・7. 851-853 (2004) 中谷晴昭： "ニフェカラントとソタロールの電気生理学的作用" 心電図 25・1. 26-34 (2005) 中谷晴昭： "各種実験動物の心筋活動電位とK^+電流系の多様性" Jpn.J.Electrocardiology 24・Suppl 1. S-142-S-147 (2004) 中谷晴昭： "分子から見た不整脈の成因と不整脈薬物療法をめぐる最近の進歩" 麻酔 53・増刊号. S81-S90 (2004) 児玉逸雄： "ダイジェスト版 不整脈薬物治療に関するガイドライン" Circ.J. 68・Suppl.IV. 1055-1077 (2004) 中谷晴昭： "講義録 循環器学" メジカルレビュー社. 428 (2004) |