| 研究課題名 | 内因性自然免疫活性化分子を用いたDNAワクチンの免疫原性増幅法 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2005 |
| 研究期間 | 2004-2005 |
| 研究課題番号 | 16790267 |
| 研究代表者 | 武下 文彦 (タケシタ フミヒコ) 横浜市立大学・医学部・助手 |
| 研究代表者番号 | 60333572 |
| 研究機関 | 横浜市立大学 研究機関番号：22701 |
| 研究種目 | 若手研究(B) 研究種目コード：260 |
| 研究分野[3] | 細菌学(含真菌学) 研究分野コード：6911 |
| キーワード | DNAワクチン / アジュバント |
| 研究概要 | 遺伝子アジュバントとして最適な分子を選択するため、Toll様受容体からのシグナル伝達に関わるアダプター分子の中で、MyD88はNF-κBを最も強く活性化し(無処置の細胞と比べて>55倍)、TRIFはIFN-βプロモーターを最も強く活性化すること(無処置の細胞と比べて>390倍)が判明し、この2つの分子を遺伝子アジュバントとして応用し、検討することとした。DNAワクチン用に開発されたpGAベクターにLacZ遺伝子を導入したpGA-LacZプラスミドを作製した。このプラスミドに、MyD88遺伝子を発現するカセットもしくはTRIFを発現するカセットを挿入し、pDX-LacZ-MyD88もしくはpDX-LacZ-TRIFを作製した。これらをBALB/cマウスに筋注エレクトロポレーション法で導入し、LacZに対する免疫応答を評価した。pDX-LacZ-MyD88ではpGA-LacZ投与群と比べ、7.8倍の抗原特異的抗体産生を誘導し、pDX-LacZ-TRIF投与群では、5.2倍の抗原特異的IFN-γ産生および有意に強力なCTL活性を誘導した。これらDNAワクチンの標的遺伝子をHAに交換し、pGA-HA、pDX-HA-TRIFを作製し、BALB/cマウスに投与後4LD_<50>のインフルエンザウイルス(H1N1)を経鼻感染させ、その後の生存率を評価した。感染後7日の生存率は、pGA-HA投与群では40%、pDX-HA-TRIF投与群では100%であった。このことにより、TRIFを遺伝子アジュバントとして用いることでDNAワクチンの免疫原性を増強し、ウイルス感染防御を増強したことが判明した。 |
| 発表文献 | Takeshita F：
"TRAF4 acts as a silencer in TLR-mediated signaling through the association with TRAF6 and TRIF."
Eur.J.Immunol. 35.
2477
(2005)
Ishii KJ： "Double stranded B-DNA activates type-I IFNs gene program via IPS-1/TBK1 pathway" Nat.Immunol. 7. 40 (2006) Takakura M： "Hyperproduction of IFN-γ by CpG Oligodeoxynucleotide-iduced exacerbation of atopic dermatitis-like skin lesion in some NC/Nga mice" J.Invest.Dermatol 125. 1156 (2005) Uematsu S： "Interleukin-1 receptor-associated kinase-1 plays an essential role for Toll-like receptor(TLR)7- and TLR9-mediated interferon-alpha induction" J.Exp.Med. 201. 915 (2005) Sugiyama T： "CpG RNA : Identification of novel single stranded RNA that stimulates human CD14+ CD11c+ monocytes" J.Immunol. 174. 2273 (2005) 武下文彦： "DNAワクチンの可能性" 臨床と微生物 32. 275 (2005) |