| 研究課題名 | シアリダ-ゼの活性発現に関する分子生物学的研究 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 1991 |
| 研究期間 | 1990-1991 |
| 研究課題番号 | 02671018 |
| 研究代表者 | 宇田 裕 (ウダ ユタカ) 新潟薬科大学・薬学部・教授 |
| 研究代表者番号 | 401690013937 |
| 研究機関 | 新潟薬科大学 研究機関番号：33101 |
| 研究分担者 | 平岩 雅男(ﾋﾗｲﾜ ﾏｻｵ)：新潟薬科大学・薬学部・助手 (551840148127) |
| 研究種目 | 一般研究(C) 研究種目コード：090 |
| 研究分野[1] | 生物系薬学 研究分野コード：773 |
| キーワード | シアリダ-ゼ / αーガラクトシダ-ゼB / αーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼ / cDNAクロ-ニング / プロサポシン |
| 研究概要 | ヒト胎盤シアリダ-ゼの活性発現に重要な係わりを持つと考えられる分子量46KDa蛋白について、そのcDNAクロ-ニング及び構造解析を行った。ヒト胎盤cDNAライブラリ-(λgtll)より、抗46KDa蛋白抗体及び46KDa蛋白のペプチド断片のアミノ酸配列を指標に合成したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとしてcDNAライブラリ-のスクリ-ニングをった。得られた全長cDNAは358個のアミノ酸をコ-ドし、N末端側に17個のシグナルペプチドを持つことがわかった。しかしながら、ホモロジ-リサ-チによりこのアミノ酸配列はヒト及び酵母αーガラクトシダ-ゼに対し高い相同性を持つことがわかり、更に検討した結果、 46K蛋白はαーガラクトシダ-ゼBとも呼ばれているαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることを明らかにした(Biochem,Biophys,Res,Commun.,163,1498(1989))。次に、この46KDa蛋白のcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせたところ、αーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼ活性の発現が確認され、46K蛋白がαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることを実証した(Biochem,Biophys,Rec,Commun.,170,231(1990) Nucleic Acids Res.,19,2518(1991))。 一方、シアリダ-ゼの活性化機構について検討を行ったところ、シアリダ-ゼの活性化がプロテア-ゼの一種アマスタチンによって特異的に阻害されることを見いだした。用いたシアリダ-ゼの部分精製標品にはアミノペプチダ-ゼ活性が存在し,これはアマスタチンにより阻害された。これらの結果は、シアリダ-ゼの活性化がプロテア-ゼの機能と何らかの係わりを示すものであるが、現在その詳細について更に検討を行っている。 さらにまた、最近カナダのグル-プによりヒト胎盤シアリダ-ゼとして60KDa蛋白の存在が示され、更に糖脂質代謝に関与する活性化因子との係わりを示唆する報告がなされたことから、この点について検討を行った。その結果、60KDa蛋白はシアリダ-ゼではなく、イムノグロブリンGであることを明らかにし、彼らの誤りを指摘した(Biochem,Biophys,Res,Commun.,177,1211(1991))。 |
| 発表文献 | Shoji Tsuji: "Molecular Cloning of a fullーlength cDNA for human αーNーacetylgalactosaminidase(αーgalactosidase)" Biochem.Biophys.Res.Commun.163. 1498-1504 (1989) Toyoaki Yamauchi: "Molecular cloning of two species of cDNA for human αーN acetylgalactosaminidase and expression in mammalian cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.170. 231-237 (1990) Toyoaki Yamauchi: "BamHl polymorphism at Nーacetylーαーgalactosaminidase locus(NAGA)" Nucleic Acids Res.19. 2518 (1991) Masao Hiraiwa: "Human placental sialidase complex:Characterization of the 60KDa protein that crossーrects with antiーsaposin antibodies" Biochem.Biophys.Res.Commun.177. 1211-1216 (1991) Masao Hiraiwa: "Characterization of sialidase and βーgalactosidase from bovine liver" Glycoconjugate J.8. 273-274 (1991) Masao Hiraiwa: "Activation of human placental and liver sialidases" Jugi Yoshimura ed.Masao Hiraiwa: "XVth International Carbohydrate Symposium,Abstract Activation of human placental and liver sialidases" Organizing Comittee of XVth International Carbohydrate Symposium, 476 (1990) |