| 研究課題名 | 好塩基球受容体遺伝子変換体とシグナル伝達 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 1996 |
| 研究期間 | 1995-1996 |
| 研究課題番号 | 07672409 |
| 研究代表者 | 手島 玲子 (テシマ レイコ) 国立衛生試験所・機能生化学部・研究員 |
| 研究代表者番号 | 50132882 |
| 研究機関 | 国立衛生試験所 研究機関番号：82601 |
| 研究種目 | 基盤研究(C) 研究種目コード：320 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[2] | 生物系薬学 研究分野コード：683 |
| キーワード | IgE受容体 / 遺伝子変換体 / 好塩基球細胞 / 情報伝達 / CD63抗原 |
| 研究概要 | 平成8年度のアレルギ-担当細胞である好塩基球細胞の高親和性IgE受容体遺伝子変換体の確立ならびに変換体を用いる情報伝達に関する研究から、下記の知見が得られた。 (1)イムノグロブリンE(IgE)受容体の動態の解析:平成7年度に確立したラットIgE受容体のβ,γ鎖のITAM(Immuno-receptor tyrosine activation motif)を含む細胞内領域を欠失した遺伝子を導入したマウスマスト(P815)細胞を用いて、IgE受容体の架橋形成後のクラスタ-形成を、長波長蛍光色素であるシアン系蛍光色素(CY5.13)を結合したIgE抗体を用いて観察した。その結果、β,γ鎖のITAM領域の欠失により、受容体の架橋形成からエンドサイト-シスに至る過程が抑制されることが判明した。このことからβ,γ鎖のITAM領域の欠失が、受容体の動きも抑制することが判明した。(2)初期シグナルの解析:無欠のIgE受容体を導入した肥満細胞では、抗原刺激に伴いカルシウムシグナルを伝達し、IgE受容体、Syk(72k)kinase,Lyn(56k)kinase,42k蛋白質のチロシンリン酸化反応の上昇が観察されたが、IgE受容体β,γ鎖の細胞内(ITAM)領域を改変した遺伝子を導入した細胞では、抗原刺激に伴うこれらの反応が抑制された。チロシン脱リン酸化酵素阻害剤である過酸化バナジウム酸による刺激においてもβ,γ鎖のITAM領域の欠失により、カルシウムシグナルの抑制が観察された。(3)脱顆粒過程の解析:上記変換体を用いた脱顆粒反応について顆粒膜抗原(CD63)の細胞膜上への表現を指標に単一細胞レベルでの解析を行ったところ、β,γ鎖の細胞内領域の欠失により、CD63抗原の細胞膜上への表現が低減化する、すなわち、脱顆粒反応も抑制されているという結果が得られた。 これらのことより、IgE受容体のβ,γ鎖の細胞内領域のリン酸化反応が、カルシウムシグナルの応答及びIgE受容体のエンドサイト-シスに重要な役割を持っていることが示された。 |
| 発表文献 | Tadahide Furuno: "Surface expression of CD63 antigen (AD1 antigen) in P815 mastocytoma Cells by transfected IgE receptors" Biochem.Biophys.Res.Commun.219. 740-744 (1996) Toshimasa Okabe: "Confocal fluorescence microscopy for antibodies against a highly conserved sequence in SH2 domains" Biochem.Biophys.Res.Commun.223. 245-249 (1996) Seiichi Kitani: "The effect of okadaic acid on histamine release,cell morphorogy and phosphorylation in rat basophilic leukemia cells" Int.Arch.Allergy Immunol.110. 339-347 (1996) |