内分泌細胞のシナプス小胞様顆粒に存在するグルタミン酸輸送体の同定と性質

研究課題名	内分泌細胞のシナプス小胞様顆粒に存在するグルタミン酸輸送体の同定と性質
レコードタイプ	研究実績報告
報告年度	1995
研究期間	1995-1995
研究課題番号	07672361
研究代表者	森山芳則　 (モリヤマヨシノリ)　広島大学・理学部・助教授
研究代表者番号	10150658
研究機関	広島大学　研究機関番号：15401
研究種目	一般研究(C)　研究種目コード：090
研究分野[2]	生物系薬学　研究分野コード：683
キーワード	松果体 / シナプス小胞 / マイクロベジクル / グルタミン酸 / 小胞型グルタミン酸輸送体 / vacuolar H^+-ATPase / 内分泌 / 化学伝達
研究概要	シナプトフィジンはマイクロベジクルのよいマ-カ-であり、これを指標として、我々は、最近、脳下垂体後葉と松果体のマイクロベジクルの単離に成功した。直径が脳下垂体後葉の場合、約60nm、松果体のものはシナプス小胞と同じ50nmであった。いずれも内部の電子密度が低い特徴がある。免疫電子顕微鏡法とイムノブロッティングを組み合わせて、マイクロベジクルの構成タンパクを解析した。その結果、マイクロベジクルにはシナプトタグミンやVAMP2等のexocytosisに関与する一連のタンパクを含んでいた。また,マイクロベジクルの総タンパクの数パ-セントをV-ATPaseが占めていた。従って、ATPの添加によりこのオルガネラは内部が酸性となり正の膜電位が形成される。このプロトンの電気化学的ポテンシャル差を利用して、脳下垂体後葉のマイクロベジクルはアドレナリンを、松果体のものはグルタミン酸をATP依存性に能動輸送した。従って、マイクロベジクルは伝達物質の濃縮装置も備えており、機能的にもシナプス小胞と同等であることがわかった。松果体マイクロベジクルのグルタミン酸トランスポ-タ-につき以下の性質を明らかにした。(1)このトランスポ-タ-は、膜電位を駆動力として用いる能動輸送系であり、このエネルギ-はV-ATPaseが供給する。(2)低濃度(4-5mM)の塩素イオンにより10倍以上活性化される。この活性化は、トランスポ-タ-内に存在する塩素イオン結合部位を介して起こる。Fイオンはこの結合部位を塩素イオンと競合するこtにより阻害する。これらの性質はシナプス小胞のグルタミン酸トランスポ-タ-の性質と一致しており、同じトランスポ-タ-(vesicular glutamate transporter)が松果体マイクロベジクルでも機能していると結論した。また、さらに、(3)この輸送系rの基質特異性をはじめて詳細に調べ、基質認識に関する情報を得た。
発表文献	Yoshinori Moriyama: "Rde of ondocrine cells microresicles in inter cell audar chemical transduction" Biol. Chem. Hoppc Zayler. (印刷中-3月号). (1996) Yoshinori Moriyama: "Vesicular L-Glutamate transporter in microvesicles from bovine pineal glands." J. Biol. Chem.270. 22314-22320 (1995) Yoshinori Moriyama: "Microvesicles solated from bovine piuedl gland specifically accumulate L-glutamate" FEBS Letters. 367. 233-236 (1995) Yoshinori Moriyama: "Microvesicles isolated from borine posterior pituitary accumulate nor epinephial" J. Biol. Chem.270. 11424-11429 (1995) Yoshinori Moriyama: "Quincrine mustard and lipophilic cations inhibitury to botne racuolar H^+-ATPase and FoFl-ATP stnthase" FEBS Letters. 359. 69-72 (1995) Mitso Tagaya: "Stntaxin 1.(HPC-1)is associated with chramattin grahules." J. Biol. Chem.270. 15930-15933 (1995)