| 研究課題名 |
α_2-アドレナリン受容体の調節機構 |
| レコードタイプ |
研究実績報告 |
| 報告年度 |
1995 |
| 研究期間 |
1995-1995 |
| 研究課題番号 |
07672348 |
| 研究代表者 |
黒瀬 等
(クロセ ヒトシ) 東京大学・薬学部・助手 |
| 研究代表者番号 |
10183039 |
| 研究機関 |
東京大学 研究機関番号：12601 |
| 研究分担者 |
長尾 拓(ﾅｶﾞｵ ﾀｸ)：東京大学・薬学部・教授 (30217971)
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| 研究種目 |
一般研究(C) 研究種目コード：090 |
| 研究分野[2] |
生物系薬学 研究分野コード：683 |
| キーワード |
受容体キナ-ゼ / α_2アドレナリン受容体 / アンチセンスDNA / モノクロナ-ル抗体 |
| 研究概要 |
α_2-アドレナリン受容体(α_2AR)を強制的に発現させた細胞に、受容体キナ-ゼ(GRK)のアンチセンス鎖を発現させ、α_2発現しているがGRKを発現していない細胞株を樹立することを試みた。しかしながら、α_2を発現させた後、次のアンチセンス鎖のGRKを発現させるため薬剤による選択を行っている間に、α_2の発現レベルが急速に消失することが明らかとなった。また、細胞にもともと存在するGRKの発現レベルがそれ程高くないために、通常のウエスタンブロットではアンチセンスDNAを発現させた後の減少量(率)を定量的に評価することが困難であった。このためうさぎの抗血清で細胞よりえられた抽出液を免疫沈降し、マウス由来の抗体で検出することを計画し、マウスよりモノクロ-ナル抗体を作製した。また、ウイルス由来のプロモ-タ-は細胞内で不活化されやすいこと、血清中に存在する少量のカテコラミンがα_2を脱感作させているためにα_2量が減少する等の可能性を考え合わせ、無血清培地で増殖する細胞に哺乳動物のプロモ-タ-を持つプラスミドを用いてトランスフェクションすることを試みようとしている。このために、α_2およびGRKを発現させるそれぞれのプラスミドに薬剤選択性を与える遺伝子および哺乳動物由来のプロモ-タ-を持つベクタ-を新たに作製した。 |
| 発表文献 |
黒瀬 等: "アドレナリン受容体" 実験医学. 14. 155-158 (1996)
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