| 研究課題名 | DNAヘリカ-ゼを用いた哺乳類細胞のDNA複製の研究 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 1995 |
| 研究期間 | 1995-1995 |
| 研究課題番号 | 07672347 |
| 研究代表者 | 榎本 武美 (エノモト タケミ) 東北大学・薬学部・教授 |
| 研究代表者番号 | 80107383 |
| 研究機関 | 東北大学 研究機関番号：11301 |
| 研究種目 | 一般研究(C) 研究種目コード：090 |
| 研究分野[2] | 生物系薬学 研究分野コード：683 |
| キーワード | DNAヘリカ-ゼB / ヘリカ-ゼモチ-フ / RecD / DNA複製 / 哺乳類細胞 / cell-free DNA複製系 |
| 研究概要 | 本研究は哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカ-ゼを同定し、このヘリカ-ゼをプロ-ブにして哺乳類細胞のDNA複製を解析することを目的としたものである。 我々は、DNA複製の温度感受性変異株を分離し解析することにより、DNAヘリカ-ゼBがDNA複製に関与するDNAヘリカ-ゼであることを示唆してきた。本研究で、DNAポリメラ-ゼα-プライマ-ゼ複合体のプラ-マ-ゼ活性に及ぼすDNAヘリカ-ゼBの影響を調べたところ、DNAヘリカ-ゼBがプライマ-ゼ活性を顕著にすることが観察され、DNAヘリカ-ゼBが原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘリカ-ゼと同様な作用をすることが明らかになった。さらに、cell-freeのDNA複製系を用いて、この系で機能するDNAヘリカ-ゼを検討したところ、調べた哺乳類細胞のDNAヘリカ-ゼのうち唯一、DNAヘリカ-ゼBのみがこの系で機能することが明らかになった。このように、機能の面からも、DNAヘリカ-ゼBがDNA複製に関与するDNAヘリカ-ゼであることを示すことができた。 さらに、DNAヘリカ-ゼBのcDNAのクロ-ニングを試み、cDNAの全長をクロ-ニングすることができた。ホモロジ-検索の結果、DNAヘリカ-ゼBは大腸菌のRecD蛋白とホモロジ-の高いヘリカ-ゼモチ-フをもつことが明らかになった。このような蛋白の遺伝子が単離されたのは真核細胞では初めてのことである。この遺伝子によりコ-ドされるアミノ酸配列からDNAヘリカ-ゼBに結合する抗体も作製することができた。今後、このcDNAを用いてtwo-hybrid systemによりDNAヘリカ-ゼBと相互作用する蛋白を検索したり、作製した抗体を用いることにより、哺乳類細胞のDNA複製機構やその開始機構を解析していく予定である。 |
| 発表文献 | Masayuki Seki: "Characterization of DNA synthesis and DNA-dependent ATPase activity at the restrictive temperature in temperature-sensitive mutants, tsFT848 cells with thermolabile DNA helicase B" Molecular and Cellular Biology. 15. 165-172 (1995) Akiko Saitoh: "Stimulation of mouse DNA primase-catalyzed oligoribonucleotide synthesis by mouse DNA helicase B" Nucleic Acids Research. 23. 2014-2018 (1995) Ken Matsumoto: "Stimulation of DNA synthesis by mouse DNA helicase B in a DNA replication system containing eukaryotic replication origins." Biochemistry. 34. 7913-7922 (1995) Toshihiko Eki: "Efficient replication of polyomavirus DNA in a cell-free system supplemented with Escherichia coli single-stranded DNA binding protein, which exhibits species-specificity in" Journal of Biochemistry. 118. 435-441 (1995) |