| 研究課題名 | 免疫電顕法を用いた小胞体-ゴルジ体間輸送装置の3次元的解析 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2004 |
| 研究期間 | 2002-2004 |
| 研究課題番号 | 14580704 |
| 研究代表者 | 山本 章嗣 (ヤマモト アキツグ) 長浜バイオ大学・バイオサイエンス学部・教授 |
| 研究代表者番号 | 30174775 |
| 研究機関 | 長浜バイオ大学 研究機関番号：34204 |
| 研究分担者 | 柾木 龍一
(マサキ リュウイチ)
関西医科大学・医学部.
講師
(70140283)
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| 研究種目 | 基盤研究(C) 研究種目コード：320 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[3] | 細胞生物学 研究分野コード：5805 |
| キーワード | 3次元免疫電子顕微鏡法 / 小胞体 / ゴルジ体 / 小胞輸送 / 精子細胞 / GM130 / ミクロソーム型アルデヒド脱水素酵素 / p125 |
| 研究概要 | 小胞体で合成された新生タンパク質は、小胞輸送によってそれが機能すべき目的地に運ばれる.小胞体からゴルジ体への輸送は、新生タンパク質の輸送の最初のステップとして、全ての小胞輸送系において極めて重要な位置を占めている.本研究では、小胞体ーゴルジ体間輸送の分子機構を明らかにすることを目的として、この輸送システムの3次元的構造を免疫電顕法を用いて解析することを試みた。そのため、細胞の包埋前に金コロイド・銀増感法を用いて、通常より厚い切片(〜250nm)を作製し、傾斜装置により立体写真の撮影、あるいは電顕トモグラフィーを行った。 1.精子細胞のゴルジ体の立体観察。ゴルジ期の精子細胞にはゴルジ体がよく発達してアクロソームの形成に関与する。ラット精巣を用いて、シスゴルジ体タンパク質のGM130を金コロイド・銀増感法を用いて検出し、250nm厚の切片を125kVの加速電圧で観察し電顕トモグラフィーを行った。その結果、精子細胞のシスゴルジ膜の細胞質面にGM130が局在することが明瞭に示された. 2.輸送小胞形成と小胞体膜タンパク質の残留機構。ミクロソーム型アルデヒド脱水素酵素の小胞体局在化シグナルはそのC末端35アミノ酸残基に存在する。このアミノ酸配列をC末にもつGFPを作製し(Masaki, Kameyama, Yamamoto. J.Biochem.134,415-426,2003)、COS細胞に発現させることによって、小胞体から輸送小胞が形成される際に、このキメラタンパク質が輸送小胞から排除され、小胞体に留まることを金コロイド・銀増感法による免疫電子顕微鏡法を用いて明らかにした. 3.輸送小胞形成に関与する新規タンパク質.Sec23と結合する新規タンパク質p125を見いだし、それが小胞体のexit siteに局在して、輸送小胞形成に働いていることを示した(東京薬科大学、生命科学部、多賀谷教授との共同研究) |
| 発表文献 | Masaki R：
"Post-translational targeting of a tail-anchored green fluorescent protein to the endoplasmic reticulum."
J.Biochem. 134.
415-426
(2003)
Nagahama M： "SVIP is a novel vCP/p97-interacting protein whose expression causes cell vacuolation." Mol.Biol.Cell. 14. 262-273 (2003) Yoshimura S： "Dynamics of Golgi matrix proteins after a block of ER to Golgi transport." J.Biochem. 135. 201-216 (2004) Nakajima k： "Involvement of BNIP1 in apoptosis and endoplasmic reticulum membrane fusion" EMBO J. 23. 3216-3226 (2004) Marutani T： "Accumulation of type IV collagen in dilated endoplasmic reticulum leads to apoptosis in Hsp47-knockout mouse embryos through the induction of CHOP." J.Cell Sci. 117. 5913-5922 (2004) Shimoi W： "p125 is localized in endoplasmic reticulum exit sites and involved in their organization" J.Biol.Chem. (印刷中). (2005) |