| 研究課題名 | 変異bc1-2を用いたアポトーシス誘導機構の解析 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2002 |
| 研究期間 | 2001-2002 |
| 研究課題番号 | 01J60088 |
| 研究代表者 | 川谷 誠 (カワタニ,マコト) 慶應義塾大学・理工学研究科・特別研究員(DC2) |
| 研究機関 | 慶應義塾大学 研究機関番号：32612 |
| 研究種目 | 特別研究員奨励費 研究種目コード：500 |
| 審査区分 | 国内 区分コード：21 |
| 研究分野[2] | 細胞生物学 研究分野コード：823 |
| キーワード | Bc1-2 / BH domain / apoptosis / anticancer drug / inostamycin / camptothecin / ceramide / dominant negative |
| 研究概要 | Bc1-2のアポトーシス制御の詳細な機能を解析する目的で、Bc1-2 familyに共通して存在するドメインに着目し、抗癌物質誘導性アポトーシスにおけるBc1-2ドメイン構造の機能解析を試みた。 1.イノスタマイシン誘導性アポトーシスにおけるBc1-2ドメイン構造の機能解析 PI代謝回転阻害剤イノスタマイシンが誘導するアポトーシス経路において、Bc1-2がceramide合成も抑制することを見出した。そこで、この抑制にBc1-2のどのドメインが関与しているかを、様々なドメイン欠損変異体を作製し検討した。その結果、Bc1-2のBH3とBH4ドメインは、ceramide合成抑制とcytochrome c放出阻害のいずれにも必要であることがわかった。一方、transmembraneドメイン欠損変異体は、cytochrome cの放出は阻害したが、ceramide合成は抑制できなかった。このことから、Bc1-2がイノスタマイシンによるceramide合成を抑制するには膜への局在が重要であることが示唆された。 2.BH1ドメイン欠損変異Bc1-2のアポトーシス促進機構の解析 種々の抗癌物質が誘導するアポトーシスにおける変異Bc1-2の作用を検討した結果、BH1ドメイン欠損変異Bc1-2はカンプトテシンによるアポトーシス誘導を促進することを見出した。この効果は、BaxやBakと結合できないBH1ドメイン内の点変異体でも同様に観察された。これらの変異体は野生型Bc1-2との結合能は保持していたが、変異体を発現させると野生型Bc1-2とBaxの結合を阻害し、かつ野生型Bc1-2のBax誘導性アポトーシス阻害活性を消失させた。これらのことから、BH1ドメイン欠損変異Bc1-2はBc1-2のドミナントネガティブ体として機能していることがわかった。以上の結果より、BH1ドメイン欠損変異Bc1-2は内在性Bc1-2の抗アポトーシス活性を阻害することで、カンプトテシンなどが誘導するアポトーシスを促進することを見出した。 |
| 発表文献 | Makoto Kawatani et al.：
"Transmembrane Domain of Bc1-2 Is Required for Inhibition of Ceramide Synthesis, but not Cytochrome c Release in the Pathway of Inostamycin-Induced Apoptosis"
Exp. Cell Res. (in press).
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