| 研究課題名 | 新規癌抑制タンパク質p110γの作用機序の解明 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2002 |
| 研究期間 | 2001-2002 |
| 研究課題番号 | 13680798 |
| 研究代表者 | 佐々木 雄彦 (ササキ,タケヒコ) 財団法人東京都医学研究機構・東京都臨床医学総合研究所・主任研究員 |
| 研究代表者番号 | 50333365 |
| 研究機関 | (財)東京都医学研究機構 研究機関番号：82609 |
| 研究種目 | 基盤研究(C) 研究種目コード：320 |
| 審査区分 | 一般 区分コード：03 |
| 研究分野[2] | 細胞生物学 研究分野コード：823 |
| キーワード | リン脂質 / シグナル伝達 / 増殖 / PI3-kinase |
| 研究概要 | 1,7種類のヒト大腸癌由来培養細胞株におけるp110γタンパク質の発現レベルを解析したところ,すべての細胞株でその発現が極めて低下していることが明らかになった。一方,P110γ遺伝子領域(ヒト7q22)のFISH解析を行ったが,いずれの細胞株においても大きな欠失は見出されなかった(最近,ヒト大腸癌において,p110γ遺伝子転写調節領域のメチル化により遺伝子発現低下が導かれることが報告された)。 2,ヒト大腸癌由来培養細胞株HCT116,DLD-1細胞株での強制発現実験系において,野生型p110γの外来的な発現はフォーカス形成能低下,軟寒天培地内でのコロニー形成低下,ヌードマウス皮下での腫瘍形成能の低下を引き起こすが,点変異導入によるキナーゼ活性不活型P110γの発現は,野生型p110γ発現と同等の作用を示した。 3,p110γは他のタンパク質にも見いだされる三つの機能ドメイン(Ras結合ドメイン,C2ドメインおよびキナーゼドメイン)を有する。これらに加え,結晶構造解析により見いだされた特徴的なヘリカルドメインおよびN末端領域の,計5種類のp110γ部分断片の発現ベクターを構築し,これらの導入細胞にて,フォーカス形成能,コロニー形成能の評価を試みた。この実験系ではRas結合ドメインあるいはキナーゼドメイン単独の発現により,フォーカス形成能,コロニー形成能の低下が導かれた。 4,しかしながら,Ras結合ドメインでの点変異導入により,Ras結合活性を消失したp110γの発現でも,コロニー形成は抑制された。 5,p110γのN末端からの欠失変異体は概ね細胞内で安定に発現しなかったので,C末端からの欠失変異体を作製した。その結果,キナーゼドメインを含むC末端領域を欠く変異体は,もはやコロニー形成抑制作用を示さなかった。 以上の結果から,p110γはそのC末端領域を介して,しかしキナーゼ活性とは独立した様式により,細胞増殖抑制および癌細胞形質の改善を導くことが,本研究によって解明された。 |
| 発表文献 | S.Clement：
"The lipid phophatase SHIP2 controls insulin sensitivity"
Nature 409.
92-97
(2001)
T.Sasaki： "CD45 is a JAK phosphatase and negatively regulates cytokine receptor signaling" Nature 409. 349-354 (2001) C.Bony： "A specific role of phosphatidylinositol 3-kinase g : A regulation of autonomic Ca2+ oscillations in cardiac cells" J. Cell. Biol. 152. 717-727 (2001) N.Joza： "Essential role of the mitochondrial apoptosis-inducing factor in programmed cell death" Nature 410. 549-554 (2001) A.Suzuki： "T cell-specific loss of Pten leads to defects in central and peripheral tolerance" Immuni 14. 523-534 (2001) J.Penninger： "CD45 : new jobs for an old acquaintance" Nat. Immunol. 2. 389-396 (2001) M.Crackower： "Regulation of myocardial contractility and cell size by distinct PI3K-PTEN signaling pathway" Cell 110. 737-749 (2002) N.Ito： "Requirement of phosphatidylinositol 3-kinase-activation and Ca influx for leukotriene B4-induced enzyme release" J. Biol. Chem. 277. 44898-44940 (2002) T.Sasaki： "Phosphoinositide 3-kinases in immunity: lessons from knockout mice" J. Biochem. 131. 495-501 (2002) A.Suzuki： "Keratinocyte-specific Pten Deficiency Results in epidermal hyperplasia, accelerated hair follicle morphogenesis and tumor formation" Cancer Res. 63. 674-681 (2003) M.Nogaimi： "Requirement of autophosphorylated tyrosine 992 of EGF receptor and its docking protein phospholipase Cgl for membrane ruffle formation" FEBS Lett. 536. 71-76 (2003) 佐々木雄彦： "発生学から再生医療へ" 医歯薬出版. 5 (2001) 佐々木雄彦： "細胞骨格と細胞運動" シュプリンガー・フェアラーク社. 6 (2002) |