| 研究課題名 | タンパク質リン酸化による精子運動の分子制御機構の研究 |
| レコードタイプ | 研究実績報告 |
| 報告年度 | 2002 |
| 研究期間 | 2000-2002 |
| 研究課題番号 | 00F00179 |
| 研究代表者 | 稲葉 一男 (イナバ,カズオ) 東北大学・大学院・理学研究科・助教授 |
| 研究機関 | 東北大学 研究機関番号：11301 |
| 研究分担者 | Ｐａｄｍａ Ｋ．Ｐ．
(パドマ Ｋ．Ｐ．)
東北大学・大学院・理学研究科.
外国人特別研究員 |
| 研究種目 | 特別研究員奨励費 研究種目コード：500 |
| 審査区分 | 外国 区分コード：22 |
| 研究分野[2] | 動物生理・代謝 研究分野コード：355 |
| キーワード | ホヤ / ダイニン / 精子 / 軸糸 / プロテインキナーゼ / 鞭毛 / タンパク質リン酸化 / プロテインホスファターゼ |
| 研究概要 | 本研究では,精子運動の分子調節機構を解明するために、原索動物カタユウレイボヤを用いて、特に(1)運動調節に必須な内腕中間鎖の同定とその機能解明、及び(2)新規カルシウム結合蛋白質の同定と軸糸内局在/機能の解析を行った。 まず、内腕中間鎖については、クラミドモナス中間鎖IC140と相同性を示すものをホヤ精巣ESTデータベースから検索し、RACEによる全長cDNA配列の決定、発現蛋白質に対する抗体の作製、局在の決定、運動活性化前後における変化について調べた。その結果、ホヤ精子軸糸の中間鎖は、クラミドモナスよりもサイズの小さい116kDaであり、同様に内腕に局在することが明らかになった。また、二次元電気泳動による解析の結果、精子活性化物質SAAFの添加により精子が活性化される際に116kDa中間鎖が脱リン酸化されることが明らかになった。 一方、抗軸糸血清を用いた精巣cDNAライブラリーのイムノスクリーニングにより、カルシニューリンBサブユニットと相同性を持つ新規の25kDaカルシウム結合蛋白質のクローンを複数単離することができた。抗体を用いた実験の結果、この蛋白質は軸糸から0.6M KCl抽出で可溶化されることがわかった。さらに、免疫電顕により、軸糸の外腕付近に局在することがわかった。0.6M KCl抽出画分をゲル濾過により分離すると25kDaカルシウム結合蛋白質は複合体として単離されてきた。二価性架橋試薬EDCを用いた架橋実験により、25kDaカルシウム結合蛋白質が、45kDaの蛋白質と複合体を作っていることが明らかになった。 |
| 発表文献 | Inaba, K.：
"EST analysis of gene expression in testis of the..."
Mol. Reprod. Develop. 62.
431-445
(2002)
Padma, P.： "Identification of a novel leucine-rich repeat protein.." Mol. Biol. Cell 14(in press). (2003) |